Dag 1
Under laborationens första dag har jag renat ut rekombinanta plasmider från bakterien e.coli. Plasmiden ska innehålla genen LL-37 men det får vi se senare under laborationen.
Vilka föroreningar har du förhoppningsvis tagit bort?
Förhoppningsvis har jag renat bort bakteriens kromosomala DNA, RNA, proteiner och andra organeller som finns i bakterien. Efter reningen hoppas jag att endast plasmider finns kvar.
Vad vet du om resultatet? Fick du ren plasmid?
För att kontrollera om det finns eventuella proteiner i plasmidlösningen lästes absorbansvärdena av i spektrofotometer vid A260 och A280 och räknades ut. En ren plasmidlösning ska ge ett värde mellan 1,8 och 1,9 om man tar kvoten av absorbansvärdena. Får man värden mellan dessa sifffror behöver det inte heller betyda att det är ren plasmidlösning därför var värden mellan 1,6 och 2,0 även godtagliga. jag fick ett värde på 1,9 och koncentration på 0,295 µg/µL och hoppas på att det är en ganska ren plasmidlösning men det vet man inte säkert.
Är det något du funderar på som du vill att vi tar upp vid genomgång nästa labdag eller vid labuppföljningen?
Nej
Då har du fått en bra kvot på din lösning och förhoppningsvis mer rena plasmider än något annat. Koncentrationen är högre än vad vi fick (0,235 µg / µL), det vore ganska intressant att veta vilka absorbansvärden ni hade vid 260 / 280 nm. Hur jämfördes era värden med resten av gruppen? I övrigt verkar det ha gått som det ska för er. Bara en liten anmärkning: bakterier inte har organeller. ;)
SvaraRaderaFörlåt, jag skrev fel, vi fick 0,255 µg/µL.
SvaraRaderaHej Camilla!
SvaraRaderaDet gick ju bra för dig trots att du fick labba ensam första dagen!
Varför vet man inte säkert att man har ren plasmid? Hur skall ni ta reda på det?
Märit
Hej Camilla :) Skriv inlägg för dag 2 så jag kan kommentera nåt :)
SvaraRaderaAbsorbansvärdet vid 260 var 0,059 och vid 280 0,031.Tack för kommentaren tänkte inte ens på att jag skrev organeller hehe menar celldebris.
SvaraRaderaMan vet inte säkert än att det endats är plasmid eftersom att det bara är Absorbansvärdet man mäter. Vi får reda på om det är ren plasmidlösning vid elektroforesen.
Carro jag har tyvärr inget resultat än så skriver när jag fått resultatet